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Título : Implementación de la técnica de cultivo celular para la identificación de síndrome reproductivo y respiratorio porcino.
Autor : Baquero Cárdenas, María Inés
Acosta Sánchez, Verónica Alexandra
Palabras clave : EFECTO CITOPÁTICO
MACROFAGOS ALVEOLARES
TIPO REPRODUCTIVA
TIPO RESPIRATORIO
Fecha de publicación : 2017
Editorial : Quito: UCE
Citación : Acosta Sánchez, Verónica Alexandra (2017). Implementación de la técnica de cultivo celular para la identificación de síndrome reproductivo y respiratorio porcino. Informe Final de Investigación presentado como requisito para optar el titulo de Médico Veterinario y Zootecnista. Carrera de Medicina Veterinaria y Zootecnia. Quito: UCE. 50 p.
Resumen : El síndrome reproductivo y respiratorio porcino (SRRP) es una enfermedad viral que afecta únicamente a los cerdos. Fue descrita por primera vez en Estados Unidos y Europa en los años 1987 y 1990 respectivamente. Clínicamente el síndrome presenta dos formas: la primera de tipo reproductiva y la segunda de tipo respiratorio, mostrando un alto grado de morbilidad en cerdos adultos y mortalidad en lechones. El cultivo celular es una técnica que permite el aislamiento e identificación del VSRRP (Virus del Síndrome Reproductivo y Respiratorio Porcino), y además es descrita por la OIE como una prueba alternativa. El objetivo de la presente investigación fue Implementar la técnica de cultivo celular en los laboratorios de Agrocalidad, para la identificación del VSRRP, mediante la utilización de macrófagos alveolares provenientes de cerdos (PAMs) de 4 y 8 semanas de edad y su confirmación a través de RT-PCR. Para ello, se tomaron 4 lechones, uno de 4 y tres de 8 semanas de edad respectivamente. Se extrajeron los pulmones y se procedió a realizar los lavados, la extracción, y cuantificación de los PAMs. Los macrófagos fueron cultivados a concentraciones de 2, 2.5, 3, y 4 x105 cel./ml, e inoculadas con la cepa viral VR-2402 a diferentes diluciones. La cepa se mantuvo en los medios DMEM y RPMI 1640 suplementados con suero fetal bovino al 10%, 10 000 UI/ml penicilina-estreptomicina, 250 μg/ml Anfotericina, 50 μg/ml gentamicina, incubado a 37°C con 5% CO2. Finalizado el proceso de incubación, se observó el efecto citopático característico en el cultivo puro y en la dilución 1:5. Se confirmó la presencia del virus mediante RT-PCR, al amplificar un fragmento esperado de 300 pb solamente en el cultivo puro. A partir de un pase más de la dilución se pudo visualizar el amplicon a partir de la dilución 1:5. En conjunto con ésta, se corrieron 22 muestras clínicamente sospechosas a SRRP, de las que se observó resultados positivos, las cuales se encuentran en estado de confirmación por parte de la autoridad competente. En conclusión, se pudo implementar exitosamente la técnica de cultivo celular mediante el uso de macrófagos alveolares para el diagnóstico del VSRRP.
The porcine reproductive and respiratory syndrome (PRRS) is a viral disease only affecting pigs. It was described in the United States and Europe in years 1987 and 1990 respectively. The syndrome clinically shows two forms: the first one is reproductive type and the other one is respiratory type, with a high rate of morbility in adult pigs and mortality in piglets. Cell culture is a technic that allows isolating and identifying the PRRSV (Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome Virus); it was additionally described by OIE as an alternative test. The purpose of current investigation was implementing the cell culture in Agrocalidad laboratories, to identify PRRV, by using alveolar macrophages from pigs (PAMs) aged 4 and 8 weeks and confirmed trough RT-PCR. Four piglets were used, one of them 4-weeks old and three of them 8-weeks old. Lungs were extracted; then washing, extraction and PAMS counting was made. Macrophages were cultivated at concentrations 2, 2.5, 3, and 4 x 105 cells/ ml and then inoculated with the viral strain VR-2402 at diverse concentrations. The strain was maintained in DMEM and RPMI 1640 medium, supplemented with bovine fetal serum 10%, 400 μl penicillin – streptomycin, 2,5 μl amphotericin, 32 μl gentamicin, incubated 37° C with 5% CO2. At the completion of incubation process, a characteristics cytopathic effect was seen in the pure culture and at a concentration of 1:5. The existence of virus was confirmed through RT-PCR, by magnifying a giving fragment of 300 pb only on the pure culture. From one more dilution pass magnification was viewed from dilution 1:5. At the same time, 22 suspicious samples of being affected by PRRS were processed, were positive results were found, which are to be confirmed by the competent authority. In conclusion, the cell culture technic was successfully implemented by using alveolar macrophages to diagnose PRRSV
URI : http://www.dspace.uce.edu.ec/handle/25000/11071
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