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Título : Optimización de un protocolo de extracción de adn genómico de leptospira spp. A partir de muestras de orina, para el diagnóstico de leptospirosis bovina por pcr
Autor : Baquero Cárdenas, María Inés
Revelo Ruales, Alexandra Paola
Palabras clave : LEPTOSPIROSIS
ZOONOSIS
EXTRACCIÓN DE ADN
CHELEX
LEPTOSPIRINA
Fecha de publicación : 2016
Editorial : Quito: UCE
Citación : Revelo Ruales, Alexandra Paola (2016). Optimización de un protocolo de extracción de adn genómico de leptospira spp. A partir de muestras de orina, para el diagnóstico de leptospirosis bovina por pcr. Trabajo de grado presentado como requisito para optar el Título de Médico Veterinario Zootecnista. Carrera de Medicina Veterinaria y Zootecnia. Quito: UCE. 61 p.
Resumen : La leptospirosis es una enfermedad zoonótica distribuida a nivel mundial, cuyo agente etiológico es Leptospira spp. En climas tropicales que presentan las condiciones de temperatura y humedad apropiadas, esta espiroqueta tiene una alta supervivencia. La leptospirosis bovina impacta de manera negativa la ganadería, ya que es causante de abortos, infertilidad y disminución de la producción láctea, generando además un importante problema de salud pública. El presente estudio tuvo la finalidad de optimizar un protocolo de extracción de ADN de Leptospira spp. a partir de muestras de orina de bovinos procedentes de ganaderías de los cantones de Chone y Pedernales de la provincia de Manabí. El ADN extraído sirvió para la estandarización de 3 protocolos de PCR en Agrocalidad, para lo cual, se colectaron 72 muestras de orina bovina (n=72). Se identificaron 10 excretores renales (n=10) mediante la amplificación del gen rrl, el cual identifica al género Leptospira. De las muestras positivas a género, 8 (n=8) amplificaron para el gen LipL 32, el cual codifica para la principal proteína de membrana externa de especies patógenas. Se evaluó la concordancia entre los métodos extracción de ADN con Chelex-100, y el kit de extracción comercial PureLink® Genomic DNA. Se determinó la existencia de una concordancia de 0,74 mediante el índice Kappa.
Leptospirosis is a zoonotic disease distributed worldwide, which its etiologic agent is Leptospira spp. This spirochete presents a high survival range in appropriate tropical climates with adequate temperature and humidity conditions. Bovine leptospirosis impacts herds negatively, as it causes abortions, infertility and decreased milk production. It is also a major public health problem. The aim of this study was to optimize a Leptospira spp DNA extraction protocol from bovine urine samples at herds in the cantons of Chone and Pedernales in the province of Manabi. The extracted DNA was used to standardize 3 PCR protocols at Agrocalidad, for which, 72 samples of bovine urine (n= 72) were collected, 10 renal excretors (n=10) were identified through the amplification of the rrl gene, which identifies Leptospira gender. From gender positive samples, 8 (n=8) amplified for the LipL 32 gene, which codifies for the major outer membrane protein of pathogenic species. Concordance was evaluated between DNA extraction methods, Chelex-100 and the commercial extraction kit PureLink® Genomic DNA. Kappa index show a 0.74 concordance
URI : http://www.dspace.uce.edu.ec/handle/25000/11987
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