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Título : Influencia del material transductor en la construcción de un microelectrodo biosensor enzimático amperométrico para la determinación IN VITRO de trifosfato de adenosina (ATP)
Autor : Bonilla Valladares, Pablo Mauricio
Ruiz Dávila, Lenin Wladimir
Palabras clave : BIOSENSOR
TRIFOSFATO DE ADENOSINA
HEXOQUINASA
MATERIAL TRANSDUCTOR
PASTA DE CARBONO
Fecha de publicación : nov-2015
Editorial : Quito: UCE.
Citación : Ruiz Dávila, Lenin Wladimir (2015). Influencia del material transductor en la construcción de un microelectrodo biosensor enzimático amperométrico para la determinación IN VITRO de trifosfato de adenosina (ATP). Tesis de Grado para optar por el Título Profesional de Químico. Carrera de Química. Quito: UCE. 77 p.
Resumen : Los microelectrodos biosensores enzimáticos amperométricos son en la actualidad una herramienta atractiva en el monitoreo de trifosfato de adenosina (ATP) debido a que son instrumentos para análisis de corto tiempo de respuesta, de bajo costo y que tienen la posibilidad de ser miniaturizados. Con el fin de determinar cuál material proporciona las respuestas analíticas con mejores características en la detección de ATP in vitro, se fabricaron microelectrodos con tres diferentes materiales de transducción amperométrica: pasta de grafito platinizada, pasta de carbón vítreo platinizada y discos de platino; conjuntamente las pastas de carbono fueron preparadas mediante dos métodos diferentes. Las membranas bioactivas de los biosensores de ATP fueron fabricadas sobre los sustratos de soporte inmovilizando glucosa oxidasa (GOx) y hexoquinasa (HEX) en polifenol mediante electropolimerización. La enzima GOx mostró tener una sensibilidad de 40.81 ± 0.86 pA mM-1 que se mantuvo estable durante 7 días sin variar significativamente y tuvo un amplio rango de linealidad desde 0.55 hasta 49.63 mM de glucosa. El par enzimático GOx/HEX fue evaluado durante 5 días de monitoreo de ATP demostrando tener una sensibilidad de 12.45 ± 0.87 pA μM-1 en el primer día y posteriormente perdió el 65% hasta el transcurso del quinto día de almacenamiento del biosensor en PBS buffer pH 7.1 a 4 °C, el rango lineal de la respuesta fue 0.17-1.99 μM.
Enzymatic amperometric biosensors microelectrodes are now an attractive tool in the monitoring of adenosine triphosphate (ATP) because they are short-time response instuments for analisis, low cost, and have the possibility of being miniaturized. In order to determine which material provides the best analytical responses characteristics in detecting ATP in vitro, microelectrodes were fabricated with three different amperometric transduction materials: platinized graphite paste, platinized glassy carbon paste, and platinum; at the same time carbon pastes were prepared by two different methods. Bioactive membranes of ATP biosensors were fabricated on supporting substrates immobilizing glucose oxidase (GOx) and hexokinase (HEX) in polyphenol by electropolymerization. GOx enzyme showed a sensitivity of 40.81 ± 0.86 pA mM-1 which remained stable over 7 days without changing significantly and had a wide range of linearity from 0.55 to 49.63 mM glucose. The enzyme couple GOx/HEX was evaluated during five days of monitoring ATP, proving to have a sensitivity of 12.45 ± 0.87 pA μM-1 on the first day and subsequently lost 65% to over fifth day storage of the biosensor in PBS buffer pH 7.1 at 4 ° C, the linear response range was 0.17-1.99 μM
URI : http://www.dspace.uce.edu.ec/handle/25000/6077
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